當前家禽疾病流行情況比較復雜,混合感染和繼發癥比較多見,臨床癥狀和病理變化也是非典型的較多,所以實驗室診斷是動物疾病診斷的重要措施。同時,對病原跟蹤進行監測,能了解到疾病的流行動態。采樣的部位、方法、樣品的保存、運輸都直接關系到最終的診斷結果,本文就家禽的病料采集小結了一些采集的原則及方法,僅供參考。
1 病料采集的原則
1.1 無菌采集
采集病料,應全程無菌操作。特別是,微生物檢查、血清學檢查涉及的樣本。無菌采集的樣品,使用的器械、容器等嚴格消毒處理,嚴格遵守相應的無菌操作流程。
為了進行病原體的分離, 病料應盡可能減少污染。 因此, 在尸體剖檢前, 應將尸體浸泡在適宜消毒劑溶液中,既做了皮膚和羽毛的消毒又減少在剖檢時羽毛和皮屑飛揚對病
料的污染。尸體剖檢時需先采集樣品,后剖檢,以免人為污染。
1.2 典型性
選取家禽的典型性,家禽要未經藥物治療,發病癥狀典型有代表,此要求對細菌傳染性疾病的檢查尤為重要。
選取病料有典型性,盡可能多的含有病原體。準備采集病料前,需初步診斷可能感染的病害,側重采集病原體常侵害部位。
1.3 適時性
根據檢測要求及檢測對象和檢驗項目的不同, 適當的采樣時機,對檢測結果很重要,因此樣品采集有時間上要求,應嚴格按規定的規程時間范圍取樣。
采集病料時間,要把握得當。從雞的尸體上取材料時,夏天不應遲于6--8h,冬季不應遲于12--24h。時間過長的,可能會導致病料組織腐爛,難以檢測出應有的病原。必要時,應急宰早期發病的活體組織,自其身上獲取病料組織。
尸體剖開腹腔時,第一時間采取病料,減少病料因暴露于空氣中而造成的污染。
病料采集后, 如不能立刻進行檢驗, 應立即存放在冰箱中。
1.4 安全采集
采集樣本過程中,應注意操作的安全性,避免人員受感染,防治病原菌擴散,擴大感染面積。
2 病料的采集方法
2.1 組織和實質器官的采集
病料的采集必須采用無菌操作。心、肝、脾、肺和腎等實質性器官要在打開胸腹后第一時間采取,應注意的是,切取的組織應該包括病變部分及相鄰的健康組織。剖開腹腔后,必須注意腸管的完整,防止剪破腸道致使腸內容物污染組織器官。采集肝臟時注意不要弄破膽囊,以免膽汁污染組織器官。
2.2 液體病料的采集
血液、膽汁、膿腫液、滲出物等液體病料,使用滅菌吸管或注射器,經燙烙部位吸取病變組織的液體,將病料注入滅菌的離心管中,封好送檢。
2.3 全血的采集方法
用滅菌注射器自雞的心臟或翅靜脈采血 2-5 毫升,注入滅菌試管中。一般在血液中加入少量的抗凝劑( 5% 的檸檬酸鈉或肝素)。無菌抽血后緩慢混勻。
2.4 血清的采集方法
用滅菌注射器自雞的心臟或翅靜脈采血 1-2 毫升,注入滅菌試管中(青霉素瓶)擺成斜面,待血液凝固血清析出后,將血清吸出注入另一個滅菌試管中,備用;簡便方法為滅菌注射器采血后抽出一定的空間,斜放靜置析出血清,將血清注入1.5ml 小離心管中。
3. 病料的保存和處理
3.1. 采集的樣品應一種樣品放入一個密封袋或容器,立即密封,防止樣品損壞、污染和
外泄等意外發生。
3.2 裝樣品的密封袋或容器應貼上標簽,標簽要防止因凍結而脫落,標簽標明采集的時間、地點、號碼和樣品名稱,并附上發病、死亡等相關資料(紙質或電子版),盡快送實驗室。
3.3 根據樣品的性狀檢驗要求的不同,作暫時的冷藏、冷凍或其它處理。
4 病料的運送
4.1 因缺乏解剖及采集樣品的相關條件,需要運送整禽尸體時,用溫和型消毒液稍稍打濕羽毛(若無溫和型消毒劑可省,切不可使用具有腐蝕性消毒劑),裝入雙層防漏性好的塑料袋完整包裝,運送。 如果需要長途運輸,事先要整個尸體放入冰箱冰凍過夜。
4.2 裝在密封袋或容器中的病料應先密封,然后裝入泡沫箱或者冷藏瓶中運送。運送過程中嚴禁傾覆。
4.3 運送的病料必須標明:送檢單位、地址、送檢病料的品種、性別、日齡、種類、數量、死亡日期、送檢日期、檢驗目的、送檢者姓名,并附臨床病例摘要(發病時間、死亡情況、臨床癥狀、產蛋及飲食情況、免疫和用藥情況等)。
4.4 運送病料時,一定注意病料要低溫保存 (需足夠多的冰袋或干冰),供病毒學檢驗的樣品,數小時內要送到實驗室,只作冷藏處理,超過數小時的要冷凍處理,可將樣品放入-20℃冰箱內凍結后再裝入有冰袋或干冰的厚泡沫箱或者冷藏瓶內運送。
5 雞常見疫病的樣品采集
5.1禽流感的樣品采集、保存和運輸
禽流感病毒主要在呼吸道粘膜細胞內增殖。
5.1.1 病禽的樣品采集 ( 1 ) 至少從5只瀕死禽采集樣品。樣品包括: 泄殖腔拭子和氣管拭子各5個; 氣管和肺的混樣 5個,腸管及內容物的混樣5個; 肝、脾、腎和腦等組織樣品各5個。采集方法: ①泄殖腔棉拭子: 將棉拭子插入泄殖腔并旋轉,使糞便沾在拭子上,放在運輸緩沖液中。②氣管棉拭子: 活雞采樣時,將棉拭子插入活雞的氣管內,輕輕擦拭氣管壁并放入緩沖液中。死亡動物采氣管樣品時,可在肺和氣管離體情況下進行采集,應將棉拭子插入較深部位用力擦拭,并按上述方法將棉拭子放在運輸緩沖液中。
③糞便樣品: 可從活禽市場采取新鮮糞便,用棉拭子沾取糞便,并將采好的樣品放在運輸緩沖液中。( 2 ) 分別采集至少10個病雞的血樣。采集10只病禽的血樣,使用一次性采血器,心臟或翅靜脈采血,每只禽采血樣2-3 ml,經離心或自然析出血清后,將血清移到指形管中。封好口,貼好標簽。不同禽只的血樣不能混合。
5.1.2 病死禽的樣品采集 無發病禽時,可從死亡不久的病禽采樣,采樣要求同病禽。棉拭子單獨放入容器,容器中盛放含有抗菌素的p H值為7.0- 7.4 的PBS 液。
5.2 雞新城疫樣品的采集、 保存和運輸
新城疫病毒存在于病雞所有器官、體液、分泌物和排泄物,以腦、脾和肺含毒量最高,骨髓含毒時間最長。
樣品: 眼分泌物、泄殖腔拭子、脾臟、氣管粘膜、腦等。
采取病料完成后,器械應先消毒再清洗,采取病料場地應徹底消毒,避免散播病原微生物,采集者用肥皂水洗滌再用消毒液洗手。要建立健全病料檔案管理制度,詳細記錄病料采集、使用、保存和銷毀情況。
附: 各種病料的采集部位
對于不同的疾病應采集不同的部位,不可盲目采集。列表中病料采集部位在前的表示發病時含毒量較高排位較前,采集病料應注意。